Kit de test de viabilité cellulaire calcéine AM (CCK-F)

 

Nom du produit	Chat. Non	Spéc.
Kit de test de viabilité cellulaire Calcéine AM (CCK-F)	G1609-100T	100T
	G1609-500T	500T

 

 

Calcein AM est basé sur la calcéine (Calcein Acetoxymethyl Ester) et introduit un groupe acétylméthoxyméthylester (AM), qui non seulement masque la partie moléculaire de la calcéine qui chélate le calcium, mais améliore également son hydrophobie, permettant ainsi à la Calcein AM de pénétrer facilement dans la membrane. des cellules vivantes, et être cisaillé par les estérases cellulaires endogènes en calcéine. La calcéine, qui a perdu son groupe AM, ne peut pas traverser facilement la membrane cellulaire et est donc retenue à l'intérieur de la cellule ; de plus, la partie moléculaire du calcium chélaté est partiellement exposée, permettant à la sonde Calcéine de se lier aux ions calcium de la cellule vivante et d'émettre une forte fluorescence verte. Cependant, les cellules mortes manquent d’estérase et ne peuvent pas être hydrolysées en calcéine AM, elles ne peuvent donc pas marquer les cellules mortes. La calcéine AM a une faible cytotoxicité et a peu d'effet sur les fonctions cellulaires, telles que la prolifération cellulaire ou la chimiotaxie lymphocytaire, ce qui en fait une excellente sonde fluorescente pour la coloration des cellules vivantes.

 

Ce produit, le kit de test d'activité cellulaire Calcein AM, également connu sous le nom de kit de comptage de fluorescence cellulaire (CCK-F), est un kit de test permettant d'évaluer l'activité, la toxicité et la prolifération des cellules en marquant les cellules vivantes avec une sonde fluorescente Calcein AM. Ce kit a été optimisé et réglé, possède non seulement une sensibilité de détection élevée et une large plage linéaire, mais ne nécessite également qu'un court temps d'incubation pour compléter la détection des cellules. Il est facile à utiliser et ne nécessite pas de marquage radio-isotopique ni d'étapes telles que la cristallisation et la dissolution, ce qui peut réduire les erreurs provoquées par les opérations expérimentales et améliorer la précision et la reproductibilité.

 

 

Expédier avec de la glace humide ; conserver à -20 degrés dans l'obscurité. ; Essayez d'éviter les congélations et décongélations répétées, valables 12 mois.

 

 

Numéro de composant	Composant	G1609-100T	G1609-500T
G1609-1	Solution de calcéine AM	100 μL	500 μL
G1609-2	Tampon de test CCK-F	10 ml	50 ml
Manuel		Un exemplaire

 

 

1. Préparation de la solution de travail Calcein AM

Pour une plaque de culture cellulaire 96-puits, utilisez 100 ul de solution de travail de calcéine AM par puits. Préparez une quantité appropriée de solution de travail de calcéine AM comme indiqué dans le tableau suivant et mélangez soigneusement.

 

Composant	10 tests	50 tests	100 tests
Solution de calcéine AM	10 μL	50 μL	100 μL
Tampon de test CCK-F	1 ml	5 ml	10 ml

 

2. Détection des cellules adhérentes :

Les étapes suivantes correspondent au schéma de détection des plaques à puits 96-, et les autres systèmes de plaques multi-puits doivent être ajustés en fonction de la situation.

un. Ensemencement cellulaire : les cellules sont ensemencées uniformément dans une plaque à puits 96- à une certaine densité et traitées avec des médicaments ou d'autres prétraitements (la densité d'ensemencement est déterminée par des facteurs tels que la taille des cellules, le taux de croissance, etc.) ;

b. (Facultatif) Lavage cellulaire : retirez le milieu de culture et lavez les cellules une à deux fois avec du PBS (recommandé G4202) pour éliminer le sérum, le rouge de phénol et/ou les médicaments qui interfèrent avec le test.

c. Marquage de la sonde : Après avoir retiré le milieu de culture cellulaire ou le tampon PBS, ajouter 100 μL de solution de travail de calcéine AM et incuber à 37 degrés pendant 30 min dans l'obscurité.

d. (Facultatif) Incubation cellulaire : continuez à incuber pendant 15-30 min avec le nouveau milieu de culture cellulaire pour vous assurer que la calcéine AM intracellulaire est entièrement hydrolysée.

e. Détection de fluorescence : Après incubation, mesurez la fluorescence avec un lecteur de microplaques à fluorescence (la longueur d'onde d'excitation maximale de la sonde Calcein AM est de 501 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 521 nm.) et calculez la viabilité cellulaire. L'intensité de la fluorescence est proportionnelle au nombre de cellules viables. La microscopie à fluorescence peut également être utilisée pour observer les résultats de la coloration.

3. Test de cellules en suspension :

un. Ensemencement cellulaire : les cellules sont ensemencées uniformément dans une plaque à puits 24- à une certaine densité et traitées avec des médicaments ou d'autres prétraitements (la densité d'ensemencement est déterminée par des facteurs tels que la taille des cellules, la vitesse de croissance, etc.) ;

b. (Facultatif) Lavage cellulaire : centrifuger la culture cellulaire à 1,000×g pendant 3-5 minutes, retirer le surnageant et laver les cellules deux fois avec du PBS pour éliminer le sérum, le rouge de phénol et/ou les médicaments qui interfèrent avec la essai.

c. Marquage de la sonde : Après centrifugation à 1 000 g pendant 3-5 min, retirez le milieu de culture cellulaire ou le tampon PBS, ajoutez une quantité appropriée de solution de travail Calcein AM et incubez à 37 degrés pendant 30 min dans l'obscurité ;

d. (Facultatif) Incubation cellulaire : continuez à incuber pendant 15-30 min avec le nouveau milieu de culture cellulaire pour vous assurer que la calcéine AM intracellulaire est entièrement hydrolysée.

e. Détection de fluorescence : après incubation, mesurez la fluorescence avec un lecteur de microplaques à fluorescence ou une cytométrie en flux (la longueur d'onde d'excitation maximale de la sonde Calcein AM est de 501 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 521 nm). La viabilité cellulaire est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence. Selon le but de l'expérience, les noyaux peuvent également être contre-colorés ou détectés avec d'autres instruments tels que la microscopie à fluorescence.

 

 

1. Centrifugez brièvement la solution Calcein AM avant utilisation pour réduire la perte de réactif.

2. La calcéine AM se décompose facilement dans les environnements humides. Aliquoter dès réception, sceller hermétiquement et conserver à -20 degré.

3. La calcéine AM est instable dans les solutions aqueuses. La solution de travail Calcein AM est prête à l’emploi et valable pour une utilisation dans les 24 heures.

4. Le temps d'incubation optimal est différent selon les types de cellules, qui peuvent être ajustés et optimisés en fonction des résultats de coloration.

5. Utilisez une plaque multipuits noire pour faire pousser des cellules lorsqu’un lecteur de microplaques à fluorescence est utilisé pour la mesure.

6. Les colorants fluorescents sont soumis à une trempe, manipulés et stockés à l'abri de la lumière.

7. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des lunettes de sécurité, des gants ou des vêtements de protection.

 

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