Calcéine-AM/PI Kit de double coloration de cellules vivantes/mortes

 

Nom du produit	Chat. Non.	Spéc.
Calcéine-AM/PI Kit de double coloration de cellules vivantes/mortes	G 1707-100T	100T

 

 

Calcein AM est basé sur la calcéine (ester acétoxyméthylique de calcéine) et introduit un groupe ester acétylméthoxyméthylique (AM), qui masque non seulement la partie moléculaire de la calcéine qui chélate le calcium, mais améliore également son hydrophobie, permettant ainsi à la calcéine AM de pénétrer facilement dans la membrane de cellules vivantes. Lorsque la calcéine AM pénètre dans la cellule, elle peut être cisaillée en calcéine par des estérases cellulaires endogènes. Avec la perte du groupe AM, la calcéine ne peut pas traverser facilement la membrane cellulaire et est donc retenue à l'intérieur de la cellule ; de plus, la partie moléculaire du calcium chélaté est partiellement exposée et la sonde Calcéine est capable d'émettre une forte fluorescence verte lorsqu'elle est liée aux ions calcium intracellulaires. Les cellules mortes manquent d'estérase, qui ne peut pas hydrolyser la calcéine AM en calcéine et ne peuvent donc pas être marquées. Le PI (iodure de propidium) est capable de s'intégrer dans la double hélice de l'ADN cellulaire pour produire une fluorescence rouge, mais il ne peut pas colorer directement les membranes cellulaires des cellules vivantes. cellules et ne peut colorer les cellules mortes que là où les membranes cellulaires ont été perturbées. Ainsi, la combinaison de Calcéine-AM avec PI permet de colorer le marquage des cellules vivantes et mortes.

Ce kit est basé sur les principes ci-dessus et a été optimisé et débogué par notre société pour effectuer un double marquage par marquage Calcéine-AM des cellules vivantes et marquage PI des cellules mortes, permettant ainsi l'analyse des niveaux de cellules vivantes et mortes.

 

 

Expédier avec de la glace humide ; Conserver à -20 degrés à l'abri de la lumière, valable 12 mois.

 

 

Numéro de composant	Composant	G 1707-100T
G1707-1	Solution de calcéine-AM	20 μL
G1707-2	Solution IP	20 μL
G1707-3	Tampon de détection	10 ml
Manuel		Un exemplaire

Remarque : Les temps de réaction ci-dessus correspondent à une seule détection de système de 100 μL.

 

 

1. Préparation de la solution de travail Calcein AM/PI

a) Retirez la solution Calcéine-AM, la solution PI et le tampon de détection du congélateur, puis laissez-les se réchauffer à température ambiante.

b) Configurez la solution de travail en fonction des besoins, le système de configuration peut se référer au tableau suivant, notez que différentes cellules ont des caractéristiques différentes, l'expérience peut être ajoutée ou réduite en fonction de la situation réelle de la concentration de la sonde utilisée, la plupart des rapport de dilution cellulaire compris entre 1 : 500-2000 ;

 

	10 échantillons	50 échantillons	100 échantillons
Solution de calcéine-AM	2 μL	10 μL	20 μL
Solution IP	2 μL	10 μL	20 μL
Tampon de détection	1 ml	5 ml	10 ml

 

2. Marqueur de coloration cellulaire :

a) Selon les exigences expérimentales, traiter les cellules avec des médicaments ou d'autres stimulations ;

b) Pour les cellules adhérentes, collecter d’abord le surnageant, digérer les cellules adhérentes restantes par la trypsine et bien mélanger toutes les cellules. Pour les cellules en suspension, collectez directement toutes les cellules.

c) Centrifuger les cellules collectées à 800-1,000 tr/min pendant 3-5 min, retirer le surnageant et laver soigneusement les cellules 2-3 fois avec du PBS ou un autre tampon pour éliminer le activité estérase résiduelle ;

d) Ajouter la solution de travail de détection de calcéine AM/PI au culot cellulaire obtenu ci-dessus et remettre les cellules en suspension doucement et soigneusement. Nous recommandons la solution de travail de détection Calcein AM/PI pour remettre les cellules en suspension afin de contrôler la densité cellulaire à 1 × 105 ~ 1 × 106 / mL.

e) Incuber à 37 °C pendant 15-30 min dans l'obscurité.

3. Observation de la coloration cellulaire :

a) Selon les exigences expérimentales, un microscope à fluorescence, une cytométrie en flux, un lecteur de microplaques et d'autres instruments peuvent être utilisés pour observer et analyser le niveau de cellules vivantes et de cellules mortes ;

b) Les cellules vivantes marquées par Calcéine-AM sont fluorescentes vertes, avec EX/EM=494/517 nm ; Les cellules mortes marquées de PI sont en fluorescence rouge, EX/EM=535/617 nm.

 

 

1. En raison des différentes propriétés de cellule à cellule et des différentes méthodes de détection, la concentration de la sonde et la plage de temps d'incubation décrites à l'étape sont uniquement à titre de référence et peuvent être ajustées en fonction de la situation spécifique.

2. Tous les colorants ont des problèmes d'extinction. Veuillez vous tenir à l'écart de la lumière lorsque vous manipulez des colorants fluorescents ou des échantillons colorés afin de ralentir l'extinction de la fluorescence.

3. Calcein-AM est très sensible à l'humidité, veuillez le distribuer de manière appropriée selon les modalités expérimentales lors de la première utilisation. La solution de travail du test Calcein AM/PI doit être distribuée et utilisée maintenant.

4. Pour votre santé et votre sécurité, veuillez porter des lunettes de sécurité, des gants ou des vêtements de protection.

 

Pour la recherche uniquement !

 

 

étiquette à chaud: calcéine-am/pi kit de coloration double cellules vivantes/mortes, Chine calcéine-am/pi kit de coloration double cellules vivantes/mortes fabricants, fournisseurs, usine